蚊のAgTRIO mRNAワクチンはマラリアに対する免疫に貢献します

npj ワクチン第 8 巻、記事番号: 88 (2023) この記事を引用

メトリクスの詳細

マラリアは、感染した蚊がマラリア原虫スポロゾイトを含む唾液を宿主の脊椎動物の皮膚に注入することで始まります。マラリアを予防するにはワクチン接種が最も効果的な戦略であり、現在の病原体ベースのワクチンを強化するための新しい戦略が緊急に必要とされています。蚊の唾液タンパク質である AgTRIO に対する能動免疫または受動免疫は、マウスのプラスモディウム感染に対する防御に貢献します。この研究では、AgTRIO mRNA-脂質ナノ粒子 (LNP) を生成し、マラリアに対するワクチンとしての潜在的な有用性を評価しました。 AgTRIO mRNA-LNP によるマウスの免疫化は、防御に関連する AgTRIO IgG2a アイソタイプ抗体を含む強力な体液性応答を生成しました。 Plasmodium berghei に感染した蚊に曝露された AgTRIO mRNA-LNP 免疫マウスは、対照マウスと比較して初期の Plasmodium 肝感染レベルが著しく低下し、生存率が増加しました。さらに、AgTRIO に対する体液性反応は 6 か月にわたって弱まるため、さらに蚊に刺されると、IgG1 および IgG2a アイソタイプを含む AgTRIO IgG 力価が上昇しました。これは、病原体ベースのワクチンと比較して独自の利点をもたらします。これらのデータは、病原体抗原とベクター抗原の両方を含む可能性のある将来のマラリアワクチンの生成に役立ちます。

ヒトのマラリアは、少なくとも 5 つの異なる種の Plasmodium 1 によって引き起こされる可能性があります。感染を防ぐにはワクチン接種が最も効果的な戦略です。しかし、現在まで非常に有効なマラリアワクチンは開発されていません2,3,4。いくつかのワクチン候補が臨床試験中です。最も先進的なワクチンの 1 つ（2021 年に WHO によって承認されたばかり）は、病原体ベースのワクチンである RTS,S です。 RTS,S は、B 型肝炎表面抗原の免疫刺激エピトープおよび AS01 アジュバントと組み合わせて、熱帯熱マラリア原虫周囲スポロゾイトタンパク質 (PfCSP) を標的とします5。防御効果は中等度であり、臨床試験では感染が 30 ～ 50% 減少しましたが、防御効果は時間の経過とともに低下します 5、6、7、8。さらに、防御は熱帯熱マラリア原虫に限定されており、他のマラリア原虫種による感染のリスクが依然としてあり、この 2 つの弱点がマラリア撲滅の可能性を制限しています9。さらに、マラリア原虫における薬剤耐性と媒介蚊における殺虫剤耐性が広範囲に出現しているため、CSPと相乗効果を発揮する、またはCSPとは独立して機能するワクチン標的を特定する戦略を開発することが不可欠になっています。

マラリアは、感染したメスのハマダラカが吸血し、唾液とともにマラリア原虫スポロゾイトを脊椎動物宿主の皮膚に注入することで伝染します10,11。蚊に刺された後、スポロゾイトは血管内を肝臓に移動し、肝細胞に侵入して感染を確立します12。蚊の唾液には生物学的に活性な分子が含まれており、これが宿主の免疫反応や止血反応を調節し 13、14、15、16、17、18、19、20、また、プラスモディウム感染にも影響を与える可能性があります。ハマダラカの唾液腺のタンパク質とマラリア原虫の蚊の外への移動前後のタンパク質間の密接な相互作用についての報告があります 21、22、23、24。また、蚊の唾液腺抽出物に対する高度免疫血清には、自然の蚊に刺された際には通常は抗原性を持たない唾液中の成分に対する高力価の抗体が含まれている可能性があり、そのような血清はマラリア原虫の感染に対してある程度の防御を提供する可能性があることも示されています23。具体的には、我々は、従来のマウスモデルとマラリアのヒト化マウスモデルの両方においてマラリア感染を減少させる抗体を誘発する少なくとも1つの抗原、ガンビエハマダラカの唾液由来のAgTRIOを同定した23。 AgTRIO 抗体は、CSP モノクローナル抗体と組み合わせると相乗的な保護も提供します 23。これらの研究は、AgTRIO に対する免疫化がプラスモジウム感染に対する防御に寄与する可能性があり、病原体の免疫原と組み合わせると有用である可能性があることを示唆しています。

SARS-CoV2 のパンデミックによって実証されたように、mRNA ワクチンは感染症を予防するための重要な技術的進歩です 25,26。 PfCSP を標的とする mRNA ワクチンを使用したいくつかの研究では、完全な防御ではないにせよ、マラリア原虫感染のマウスモデルにおいてその有用性が証明されました 27、28、29。さらに、mRNA ワクチン 29、30、31 を使用すると、いくつかの抗原の標的化が容易に実現できます。これにより、PfCSP ベースのワクチンを強化するために、より強力な抗マラリア応答が生成される可能性があります。我々は、蚊の唾液タンパク質AgTRIOをコードするmRNAを含む脂質ナノ粒子（LNP）を作製した。 C57BL/6 マウスを AgTRIO mRNA-LNP ワクチンで免疫すると、肝臓における初期のプラスモジウム負荷量と、プラスモジウムに感染した蚊への曝露後のその後の寄生虫血症が減少しました。さらに、AgTRIO に対する IgG 応答は蚊に刺されると促進される可能性があり、これにより、病原体ベースのワクチンに見られる防御期間に関する問題が解決される可能性があります。これらのデータに基づいて、AgTRIO mRNA-LNP ワクチンは、マラリアに対する多抗原ワクチンアプローチの一部として有用である可能性があります。

AgTRIO mRNA-LNPがAgTRIO特異的抗体を生成できるかどうかを確認するために、C57BL / 6マウスを10μgのAgTRIO mRNA-LNPまたはコントロールのルシフェラーゼ（Luc）mRNA-LNPで3回免疫しました（図1a）。各注射の 2 週間後に血液を採取し、精製大腸菌由来 AgTRIO を用いた酵素結合免疫吸着検定法 (ELISA) によって分析しました (図 1b)。 AgTRIO mRNA-LNP による免疫化は、最初の追加免疫化後に顕著な IgG 応答を生成しました。免疫によってネイティブ AgTRIO を認識する抗体が得られたかどうかを確認するために、メスのハマダラカガンビエから唾液腺抽出物 (SGE) を収集し、ELISA 用にプレートを SGE でコーティングしました。 AgTRIO mRNA-LNP による免疫化により、SGE に対する有意な抗体が生成されました (図 1c)。私たちの最近の研究では、AgTRIO モノクローナル抗体 (mAb) の IgG サブクラスがプラスモディウム感染に対する防御効果に影響を与える可能性があることを発見しました 32。特に、AgTRIO に対するマウス IgG2a mAb は、最も強力な保護を提供しました 32。 ELISAにより、AgTRIO mRNA-LNPがIgG2a抗体を含むAgTRIOに対する多様な抗体アイソタイプを生成することがわかりました（図1d）。

10μgのAgTRIO mRNA-LNPまたは対照mRNA（Luc mRNA-LNP）を注射され、2週間間隔で2回追加免疫されたC57BL/6雌マウスの群を示す実験スキーム。ｂ各免疫化の２週間後、マウスから採血した。抗原として組換えAgTRIOを使用するELISAにより、血清の1:2,500および1:12,500希釈物をAgTRIO特異的IgG抗体について検査した。 c 最終検査後に採取した血清の 1:2,500 希釈液を、唾液腺抽出物に対する AgTRIO 特異的 IgG 抗体について ELISA によって検査しました。 (中央値±IQR、マンホイットニーU検定を使用したp<0.05) d 血清の1:2,500希釈を使用して、AgTRIO特異的IgG1、IgG2aおよびIgG2bを測定した。血清の 1:500 希釈液で AgTRIO 特異的 IgG3 抗体を調べました。

我々の以前の研究では、AgTRIOによる能動免疫またはAgTRIO抗血清による受動移入により、マウスにおける蚊媒介プラスモジウム感染症に対する部分的な防御が得られました23。AgTRIO mRNA-LNPによる免疫がプラスモジウム感染に影響を与えるかどうかを判断するために、C57BL/6マウスに10μgを免疫しました。 AgTRIO mRNA-LNPを2週間間隔で3回。対照群には10μgのLuc RNA-LNPを投与した。最後の免疫化から 3 週間後、P. berghei に感染した A ガンビエ蚊 3 匹をそれぞれ使用してマウスを攻撃しました。 AgTRIO mRNA-LNPで免疫したマウスでは、Luc mRNA-LNPで免疫したマウスと比較して、P. bergheiの肝臓レベルの中央値が68％減少しました（図2a、p = 0.048）。寄生虫血症などのマラリア感染の後期段階の発症に対するこのAgTRIO mRNA-LNPの影響をさらに調べるために、追加のマウスグループを10μgのAgTRIO mRNA-LNPまたはLuc mRNA-LNPで3回免疫し、その後曝露しました。動物をP. bergheiに感染した蚊3匹に与えた。感染した蚊に刺されてから5日後、AgTRIO mRNA-LNPワクチンを接種したグループでは寄生虫血症が有意に減少しました（図2b、p = 0.012）。次に、カプランマイヤー生存曲線を使用して、感染の証拠として0.01％の寄生虫血症の動態を実証しました（図2c）。肝臓負荷および5日目の寄生虫血症の結果と一致して、AgTRIO mRNA-LNPワクチンを投与したグループでは感染マウスの数が少なかった（ログランク検定によるp = 0.036）。これらすべてのデータは、AgTRIO mRNA-LNP による免疫化がマウスモデルにおける肝臓のマラリア原虫負荷を顕著に減少させ、マラリアに対する防御に寄与できることを実証しています。

C57BL/6 マウスを 10 μg の AgTRIO mRNA-LNP またはコントロール mRNA (Luc) で 3 回免疫しました。最後の追加免疫から 3 週間後、免疫マウスを P. berghei に感染した蚊 3 匹に曝露しました。 a 40時間後、肝臓を解剖し、マラリア原虫感染レベルをRT-PCRによって測定した。 (中央値 ± IQR、Mann Whitney U 検定を使用した p < 0.05)。 b 同じ方法でワクチン接種され、感染した蚊に刺されたマウスを用いた別の実験では、感染後 5 日目に寄生虫血症のレベルが測定されました。 (中央値 ± IQR、Mann Whitney U 検定を使用した p < 0.05)。 c カプラン・マイヤー生存曲線を使用して、非感染マウスの割合を示しました。フローサイトメトリーにより、感染は寄生虫血症の 0.01% であると判定されました。 2 つのグループ間のログランク検定による p = 0.036。

AgTRIO は蚊の唾液で高度に発現しているため 23、次に、ワクチン接種後に自然に起こる IgG 応答の低下が、AgTRIO の場合、蚊に刺されたことによって促進されるかどうかを調べました。 C57BL/6 マウスを 3 回の用量の AgTRIO mRNA-LNP で免疫し、一定の間隔で IgG 力価を測定しました。実験開始から 18 週間後 (最後の追加免疫から 14 週間後) までに、AgTRIO に対する IgG 力価 (中央値: 0.45) は、実験開始から 10 週間後 (中央値: 0.716、中央値: 0.716) と比較して約 40% 減少しました。図3a)。次に、1 つのマウスグループを 3 週間毎週 10 回の非感染蚊に刺され、対照グループのマウスは AgTRIO に曝露されませんでした。マウスに餌を与えた場合、繰り返し蚊に刺されても重大な悪影響は見られませんでした。抗AgTRIO IgG濃度は、蚊に刺されたグループで顕著に増加しましたが、対照グループではIgGレベルが減少し続けました（図3a、Wilcoxon対応ペア符号付き順位検定によるp = 0.03）。次に、AgTRIO 特異的抗体のどの IgG サブクラスが蚊に刺されたことによってブーストされるかを決定しました。 ELISA によれば、AgTRIO 特異的 IgG1 および IgG2a は蚊に刺された後に有意に増加しました (図 3b)。これらの結果は、蚊に刺された場合、防御に関連する IgG アイソタイプを含む、免疫化後の AgTRIO に対する IgG 応答が維持される可能性があることを示しています 32。

マウスのグループに 10 μg の AgTRIO mRNA-LNP またはコントロール mRNA (Gluc mRNA-LNP) を注射し、4 週間にわたって 2 回追加免疫しました。血清は実験開始後 10、18、および 25 週間後に採取されました。血清の 1:2,500 希釈液を ELISA により総 AgTRIO 特異的 IgG 抗体について検査しました。 b 血清の 1:2,500 希釈を使用して、AgTRIO 特異的 IgG1、IgG2a、および IgG2b を測定しました。血清の 1:500 希釈液で AgTRIO 特異的 IgG3 抗体を調べました。 (中央値 ± IQR、Wilcoxon 対応ペア符号付き順位検定を使用した p < 0.05)。赤いバー: 18 週間後、毎週 10 匹の蚊に 3 回曝露。青いバー: 非露光。

血液粉を探索するとき、蚊は摂食を促進するために唾液を分泌し、同時にスポロゾイトが皮膚に放出されます10,11。したがって、唾液の成分は、咬傷部位でのマラリア原虫の伝播に直接的または間接的に影響を与える可能性があり、病気予防の潜在的な標的となります23,33。我々の以前の研究では、唾液タンパク質の1つであるAgTRIOに対する受動免疫または能動免疫が、A. gambiaeまたはA. stephensiの蚊刺によって伝播するP. bergheiおよびP. falciparumに対して部分的な防御を提供することを実証しました23。さらに、AgTRIO は蚊の唾液中で高度に分泌されており、RNAi によって AgTRIO が抑制された蚊は、対照の蚊と比較してスポロゾイトをマウスの皮膚に効率的に伝達しないことを実証しました 22,23。このため、AgTRIO は多成分ワクチンに含めるのに適した候補になります。この研究では、防御に関連する IgG2a アイソタイプ抗体を含む、AgTRIO 特異的な体液性応答を誘導する AgTRIO mRNA-LNP を生成しました 32。 AgTRIO mRNA-LNP は、マウスのプラスモジウム感染を大幅に減少させました。我々の発見は、mRNAアプローチを用いたAgTRIOに対する免疫化が、節足動物から脊椎動物宿主へのマラリア原虫の感染に対する防御に貢献できることを示している。

我々の以前の研究では、完全フロイントアジュバント中のAgTRIOタンパク質で免疫し、その後不完全フロイントアジュバントを含むAgTRIOタンパク質で追加免疫したマウスは、対照群と比較して肝臓負荷が50％低かった23。同じ研究では、対照マウスの 95% と比較して、AgTRIO で免疫化したマウスの 66% に検出可能な寄生虫血症が見られました 23。フロイントのアジュバントは免疫刺激性が高いため、原理の証明には役立ちますが、有毒な副作用があるため人間に投与することはできません。 AgTRIO mRNA アプローチを使用すると、AgTRIO mRNA-LNP を投与されたマウスの 44.4% (4/9) が攻撃後に 0.01% の寄生虫血症レベルに達しましたが、対照群では 88.8% (8/9) でした。我々の以前の研究では、IgG2a AgTRIO モノクローナル抗体は、他のアイソタイプモノクローナル抗体と比較して、マウスのプラスモディウム感染に対して実質的な保護を提供し、その保護は Fc 領域に依存していました 32。我々の未発表の結果では、AgTRIO タンパク質とミョウバンアジュバントによる免疫化後に AgTRIO 特異的な IgG1 および IgG2b 応答がありましたが、有意な IgG2a 応答はありませんでした。 AgTRIO-mRNA LNP は、IgG2a 抗体の生成を含む強力な IgG アイソタイプ応答を提供し、プラスモディウム感染に対するより効果的な防御を提供する可能性があります。これらすべての結果は、AgTRIO mRNA-LNP アプローチがタンパク質ベースのワクチンと比較して利点をもたらす可能性があることを示しています。

さらに、感染症やワクチン接種の後は、時間の経過とともに防御免疫反応が低下することが大きな懸念事項となっています。一例として、ほとんどの COVID-19 ワクチンでは、体液性反応は 6 か月後に 50% 以上減少します 34、35、36、37、38。防御的な体液性反応を維持するには、追加免疫ワクチンが必要です。他のワクチンと同様に、PfCSP ベースのワクチンは時間の経過とともに防御力が低下します 6,7。 AgTRIO に対する体液性反応は 6 か月の免疫化後に低下しましたが、抗体は蚊に刺されると増加する可能性があります。一方で、ヒトでもマウスでも繰り返し蚊に刺された後では、AgTRIO に対する有意な体液性免疫反応は見られません 23 。これは、ブースト効果が AgTRIO による能動免疫による初回刺激後にのみ発生することを示しています。我々の研究では、AgTRIO mRNA-LNP ワクチンによる予防接種後に繰り返し蚊に刺された際に認められた、発赤、腫れ、アレルギー反応などの重大な副作用はありませんでした。ただし、マウスでの結果は必ずしもヒトと直接相関するとは限らないため、ヒトでの安全性を直接調べることが重要です。この自然に獲得されたブースト効果により、AgTRIO ベースの免疫化には、従来の病原体ベースのワクチンに比べて独自の利点が与えられます。マラリア流行地域では、ベクターへの持続的な曝露により、AgTRIO mRNA-LNP ワクチン接種を受けた個体の AgTRIO 抗体が容易に増加し、維持される可能性があります。全体として、我々の研究は、蚊の唾液タンパク質を標的としたmRNAワクチン戦略がマラリアに対する次世代ワクチンの開発に役立ち、従来のマラリア原虫ベースのワクチンと併用できる可能性があることを実証している。

A. gambiae (4arr 株) 蚊は、イェール大学の昆虫館で、27 °C、湿度 80%、12/12 時間の明暗サイクル下で飼育され、標準実験室条件下で 10% スクロースで維持されました。 Swiss Webster マウスおよび C57BL/6 マウスは Charles River Laboratories から購入しました。すべての動物実験プロトコルは、エール大学施設内動物管理使用委員会によって承認されました (プロトコル番号: 2022–07941)。すべてのプラスモジウム感染はバイオセーフティレベル 2 の動物施設で行われました。すべての動物実験は、米国研究評議会による実験動物の管理と使用に関するガイドに従って行われました。すべての実験において、マウスはイェール大学にある国際実験動物管理評価認定協会 (AAALAC) 認定の動物施設で飼育および世話されました。眼窩後採血または蚊の給餌のために、マウスをケタミン/キシラジン(体重1kg当たり100mg/10mg)の腹腔内注射により麻酔した。実験全体が終了したら、AVMA の安楽死ガイドラインに準拠した方法で CO2 チャンバーを使用してマウスを安楽死させました。死亡後、マウスを確実に死亡させるための二次的手段として頸椎脱臼を行った。

シグナルペプチドを含まないAgTRIO (AGAP001374) は、22番目と389番目のアミノ酸の間でコドン最適化され、その後、101ヌクレオチド長のポリ(A)テールを含むようにAgTRIOまたはルシフェラーゼ(コントロール) mRNAが転写されました。 UTP の代わりに N-1-メチルプソイドウリジン (m1Ψ-5')-三リン酸を使用して、修飾ヌクレオシド含有 mRNA を生成しました。インビトロで転写された mRNA のキャッピングは、トリヌクレオチド cap1 アナログである CleanCap を使用して共転写的に実行されました。 mRNA はセルロース精製によって精製されました 39。次に、酸性 pH 4.0 の mRNA 水溶液を使用して mRNA を LNP にカプセル化し、イオン化可能なカチオン性脂質/ホスファチジルコリン/コレステロール/PEG 脂質 (50:10:38.5:1.5 mol) からなる脂質 40,41 の溶液と混合しました。 /モル）28、29、30、31。カプセル化のために、RNA は約 0.05 (wt/wt) の比率で脂質と混合されました。 Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd、Malvern、UK) 装置を使用した動的光散乱によって測定した LNP の直径は約 80 nm で、-80 °C で保存されています。

5週齢の雌C57BL/6マウスを10μgのAgTRIO mRNA-LNPまたは対照(Luc mRNA-LNP)で免疫し、2週間後および4週間後に同量のワクチンで追加免疫した。各免疫の 2 週間後、各マウスから血清を採取し、ELISA を使用して IgG 応答をテストして、抗原特異的抗体を確認しました。蚊に刺されると IgG が上昇するかどうかを確認するために、AgTRIO IgG 力価が低下した後、10 匹の未感染の蚊にマウスを食べさせました。対照マウスは蚊に曝露されなかった。

スポロゾイト感染後の肝臓におけるマラリア原虫の負荷は、肝臓組織のハウスキーピング遺伝子として使用されている M. musculus 肝細胞核因子 4 α、hnf4α に対して正規化された P. berghei 18 S rRNA の発現レベルを評価することによって決定されました 23,33。これらのデータは、ハウスキーピング遺伝子の 10,000 コピーあたりの標的遺伝子のコピー数として表されました。 TRIzol 試薬 (Thermo Fisher Scientific) を使用して、マウス肝臓から全 RNA を精製しました。すべての抽出は製造元のプロトコルに従いました。 iScript RT-qPCR キット (Bio-Rad) を使用して、RNA から cDNA を生成しました。 iTaq SYBR Green Supermix (Bio-Rad) を使用して、リアルタイム PCR を CFX96 リアルタイムプラットフォーム (Bio-Rad) で実行しました。 PCR には、95 °C で 2 分間の初期変性、95 °C で 15 秒、60 °C で 15 秒、72 °C で 20 秒の 50 サイクルが含まれます。各サイクル後、72 °C で蛍光の読み取り値を取得しました。各反応の終了時に、PCR 産物の同一性を確認するために融解曲線 (60 ～ 95 °C) をチェックしました。スポロゾイト遺伝子の発現に使用したプライマーを表 1 に示します。寄生虫血症を評価するために、眼窩後出血によりすべてのマウスから 20 μl の血液を採取しました。寄生虫血症の割合は、フローサイトメトリー (CytoFLEX、ThermoFisher) により GFP 陽性 RBC を総 RBC 数と比較することによって決定されました。

シグナルペプチドに対応する領域を含まない AgTRIO 遺伝子配列は、細菌発現ベクター pET21b (GE Healthcare) にクローニングされています 23。 AgTRIO 発現プラスミドは、BL21 ケミカルコンピテントセル (Thermo Fisher Scientific) に形質転換されます。 AgTRIO タンパク質の発現は、0.1 mM IPTG を使用して 17 °C で 24 時間誘導されます。細胞は、完全にEDTAを含まないプロテアーゼ阻害剤錠剤(Roche)を含むPBS中で超音波処理されます。可溶性 AgTRIO は、サイジング、イオン交換、アフィニティークロマトグラフィーを組み合わせて上清から精製されます。組換え AgTRIO の発現はイムノブロットによって確認され、これは我々の以前の研究で得られた AgTRIO に対して産生された抗 AgTRIO 血清でプローブされます 23。タンパク質の純度は SDS-PAGE によって決定され、濃度は BCA タンパク質アッセイキット (イリノイ州ピアス) によって決定されます。

抗原特異的な抗体応答は ELISA によって測定されました 42,43。唾液腺抽出物（SGE）を調製するために、20個の唾液腺を100μlのPBS中に収集し、SGEタンパク質の濃度は0.2mg/mlであった。 96 ウェルマイクロプレートを精製 AgTRIO (1 μg/ml) または SGE で一晩コーティングしました。ブロッキング緩衝液（PBS、0.05% tween-20、および 1% ウシ血清アルブミン）でブロッキングした後、異なる希釈率のマウス抗血清を PBS で希釈し、ウェルに添加し、室温で 2 時間インキュベートしました。洗浄緩衝液 (PBS、0.1% tween-20) で洗浄した後、1:10000 に希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウス抗体 (Invitrogen、カタログ番号 62-6520) を使用して総 IgG を検出しました。 IgG サブクラスの検出には、西洋わさびペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウス IgG1、IgG2a、IgG2b、または IgG3 重鎖抗体 (Abcam、カタログ番号 ab97240、ab97245、ab97250、ab97260) を 1:10,000 に希釈して使用して検出しました。特定の IgG サブクラス。

P. berghei (ANKA GFPcon、ATCC) は、前述のように 6 ～ 8 週齢の雌スイスウェブスターマウスまたは C57BL/6 マウスで連続継代によって維持されました 23。簡単に言うと、Swiss Webster または C57BL/6 マウスに、腹腔内注射により P. berghei に感染した赤血球を投与しました。次に、寄生虫血症が約 5% になった時点で、A. ガンビエ蚊が感染マウスから血液を摂取しました。 P. berghei 感染から 17 ～ 24 日後、唾液腺の蛍光シグナルを使用して蚊を選別しました。

グラフ作成のために中央値を計算するために、少なくとも 3 つの生物学的複製からのデータが使用されました。統計分析では、蚊に刺されたことでAgTRIO特異的IgGが増加したかどうかをELISAで判定するために、無関係な群に対してはマン・ホイットニー検定を、同じ群に対しては連続サンプリングによる片側Wilcoxon対応ペア符号付順位検定を採用し、蚊に刺されたことによりAgTRIO特異的IgGが増加したかどうかを判定した。差とデータは四分位範囲 (IQR) の中央値として表示されました。 <0.05 の p 値は統計的に有意であるとみなされます。すべてのデータの分析、グラフ、統計は、Prism 9.0 ソフトウェア (GraphPad ソフトウェア) を使用して実行されました。

研究デザインの詳細については、この記事にリンクされている Nature Research レポートの概要をご覧ください。

この研究に関連するすべてのデータは論文に記載されています。リソース、データ、および試薬のリクエストは、責任著者である Y.-MC 博士 ([email protected]) に送信してください。この研究で説明されているすべての独自の試薬は、完了した材料移転契約を締結した責任著者に要求に応じて入手できます。

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技術的な支援をしていただいた Kathleen DePonte 氏と Ming-Jie Wu 氏に感謝します。これらの研究は、国立アレルギー感染症研究所およびハワード・ヒューズ医学研究所新興病原体イニシアチブからの助成金 AI158615、AI142708、および AI145779 によって支援されました。

米国コネチカット州ニューヘブンのイェール大学医学部内科感染症部門

ユーミン・チュアン、セルマ・アブネアメ、ハミダ・ラドゥワン、エロル・フィクリグ

米国ペンシルバニア州フィラデルフィア、ペンシルバニア大学RNAイノベーション研究所および医学部

モハマド＝ガブリエル・アラメ & ドリュー・ワイズマン

L2 Diagnostics, LLC、米国コネチカット州ニューヘブン

ミシェル・レディゼ

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Y.-MC と EF は研究を概念化し、設計しました。 Y.-MC、SA、HR は、防御のための採血やチャレンジを含む動物の予防接種を計画し、実施しました。 YM.C と SA は ELISA アッセイを実施しました。 M.-GA および DW は mRNA を生成し、空の LNP を生成し、mRNA を LNP にカプセル化し、LNP の物理化学的特性評価を実行しました。 Y.-MC、ML、DW、および EF は、共著者の協力を得てこの論文を執筆しました。

ユ・ミン・チュアン氏への手紙。

EF は株式を保有しており、L2 Diagnostics のコンサルタントを務めています。他のすべての著者は、競合する利益を宣言していません。

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転載と許可

Chuang, YM.、Alameh, MG.、Abouneameh, S. 他蚊 AgTRIO mRNA ワクチンは、マラリアに対する免疫に貢献します。 npj ワクチン 8、88 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s41541-023-00679-x

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受信日: 2023 年 2 月 20 日

受理日: 2023 年 5 月 16 日

公開日: 2023 年 6 月 7 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41541-023-00679-x

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